Որքա՞ն արժե կապակցման վերափոխումը:
Որքա՞ն արժե կապակցման վերափոխումը:

Video: Որքա՞ն արժե կապակցման վերափոխումը:

Video: Որքա՞ն արժե կապակցման վերափոխումը:
Video: Հիմնական 7 պատճառներ, որոնցից ելնելով՝ ԱՄՆ-ի դեսպանատունը կարող է մերժել ձեր վիզայի հայտը 2024, Նոյեմբեր
Anonim

Փոխակերպում . Ավելացնել 1-5 մկլ միջակայքում կապակցում խառնուրդ իրավասու բջիջների համար վերափոխում . Երկարացված կապակցում PEG-ով առաջացնում է անկում վերափոխում արդյունավետություն (արագ Կապակցում Հավաքածու): Խոշոր կոնստրուկցիաների համար (>10,000 bp) խորհուրդ է տրվում էլեկտրոպորացիա:

Հետևաբար, որքա՞ն կապակցման արտադրանք է անհրաժեշտ փոխակերպման համար:

Փոխակերպում . Ավելացնել 1-5 մկլ միջակայքում կապակցում խառնուրդ իրավասու բջիջների համար վերափոխում . Երկարացված կապակցում PEG-ով առաջացնում է անկում վերափոխում արդյունավետություն (արագ Կապակցում Հավաքածու): Խոշոր կոնստրուկցիաների համար (>10,000 bp) խորհուրդ է տրվում էլեկտրոպորացիա:

Հետագայում հարցն այն է, թե ինչ է կապակցումը և փոխակերպումը: Տիպիկ կլոնավորման փորձի ժամանակ հետազոտողները նախ դնում են ԴՆԹ-ի մի կտոր, օրինակ՝ գեն, ԴՆԹ-ի շրջանաձև հատվածի մեջ, որը կոչվում է պլազմիդ: Այս քայլը օգտագործում է սահմանափակող ֆերմենտներ և ԴՆԹ լիգազ և կոչվում է a կապակցում . Այն բանից հետո, երբ ա կապակցում , հաջորդ քայլը ԴՆԹ-ն բակտերիաների մեջ փոխանցելն է՝ այսպես կոչված վերափոխում.

Հետագայում կարելի է նաև հարցնել, թե որքան ԴՆԹ է անհրաժեշտ կապակցման համար:

Արդյունավետության համար վեկտոր + ներդիրի ընդհանուր կոնցենտրացիան պետք է լինի 1-10 Մգ/մլ միջակայքում կապակցում . Վեկտոր:Խորհուրդ է տրվում 1:1-ից 1:10-ի միջև ներդիրի մոլային հարաբերակցությունները (բնորոշ է 1:3): Եթե վստահ չեք ձեր ԴՆԹ կոնցենտրացիաների, կատարել բազմաթիվ կապեր տարբեր հարաբերակցությամբ:

Որքա՞ն ժամանակ կարող եք պահել կապակցման ռեակցիան:

Ligations կարող են դա արվի սենյակային ջերմաստիճանում կամ ավելի սառը (կարծում ենք՝ 12-16°C) գիշերում կամ նույնիսկ մի քանի օրում, Եթե դու իսկապես զբաղված են: Դու կարող ես նույնպես պահել մի ligation սառնարանում և ավելի ուշ հանել այն սենյակային ջերմաստիճանում մնալու համար երկար ըստ անհրաժեշտության:

Խորհուրդ ենք տալիս: