Ինչպե՞ս է ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիան հաշվարկվում սպեկտրոֆոտոմետրի միջոցով:
Ինչպե՞ս է ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիան հաշվարկվում սպեկտրոֆոտոմետրի միջոցով:

Video: Ինչպե՞ս է ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիան հաշվարկվում սպեկտրոֆոտոմետրի միջոցով:

Video: Ինչպե՞ս է ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիան հաշվարկվում սպեկտրոֆոտոմետրի միջոցով:
Video: Սպիտակուցների կառուցվածքն ու հատկությունները / ԿԵՆՍԱՔԻՄԻԱ/ 2024, Ապրիլ
Anonim

ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիան է գնահատվել է կլանումը չափելով 260 նմ-ում, կարգավորելով Ա260 պղտորության չափում ( չափվում է կլանումը 320 նմ-ում), բազմապատկելով կողմից նոսրացման գործոնը և օգտագործելով հարաբերությունները, որ Ա260 1,0 = 50 մկգ/մլ մաքուր dsDNA:

Մարդիկ նաև հարցնում են՝ ինչպե՞ս եք գտնում ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիան և մաքրությունը։

Գնահատելու համար ԴՆԹ-ի մաքրություն , չափել կլանումը 230 նմ-ից մինչև 320 նմ՝ այլ հնարավոր աղտոտիչներ հայտնաբերելու համար: Առավել տարածված մաքրության հաշվարկ 260 նմ ներծծման հարաբերակցությունն է՝ բաժանված 280 նմ ցուցումների վրա: Լավ որակյալ ԴՆԹ կունենա Ա260280 հարաբերակցությունը 1,7–2,0:

Նմանապես, ո՞րն է ԴՆԹ-ի լավ կոնցենտրացիան: Ա լավ որակ ԴՆԹ նմուշը պետք է ունենա Ա260280 հարաբերակցությունը 1,7-2,0 և Ա260230 հարաբերակցությունը 1,5-ից ավելի է, բայց քանի որ տարբեր տեխնիկայի զգայունությունը այս աղտոտիչների նկատմամբ տարբեր է, այս արժեքները պետք է ընդունվեն միայն որպես ձեր նմուշի մաքրության ուղեցույց:

Այս առնչությամբ, ինչպե՞ս է NanoDrop-ը հաշվարկում ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիան:

Դուք կլանման արժեքը 260 նմ-ում բազմապատկում եք ֆիքսված գործակցով (դա 50 է ԴՆԹ ) և դուք ստանում եք ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիան . Voilá. (Լավ, դա տեխնիկապես 10 մմ հաստությամբ նմուշի A260-ն է, որը բազմապատկվում է 50-ով. NanoDrop արտահայտում է A260-ը, կարծես նմուշը 10 մմ հաստությամբ է, ինչպես ստանդարտ կուվետում):

Ինչու՞ պետք է օգտագործեինք սպեկտրոֆոտոմետր մեր ԴՆԹ-ն քանակականացնելու համար:

Ա սպեկտրոֆոտոմետր է կարող է որոշել նուկլեինաթթուների միջին կոնցենտրացիաները ԴՆԹ կամ խառնուրդի մեջ առկա ՌՆԹ, ինչպես նաև դրանց մաքրությունը: Օգտագործելով Գարեջուր-Լամբերտի օրենքը է հնարավոր է կապել կլանված լույսի քանակությունը կլանող մոլեկուլի կոնցենտրացիայի հետ:

Խորհուրդ ենք տալիս: