Ո՞րն է PCR արտադրանքի մաքրման նպատակը:
Ո՞րն է PCR արտադրանքի մաքրման նպատակը:

Video: Ո՞րն է PCR արտադրանքի մաքրման նպատակը:

Video: Ո՞րն է PCR արտադրանքի մաքրման նպատակը:
Video: Fermentation: Lactic Acid, Alcohol & Glycolysis 2024, Նոյեմբեր
Anonim

Մաքրում ԴՆԹ-ից ա ՊՇՌ ռեակցիան սովորաբար անհրաժեշտ է ներքևում օգտագործման համար և հեշտացնում է ֆերմենտների, նուկլեոտիդների, պրայմերների և բուֆերային բաղադրիչների հեռացումը: Ավանդաբար դա իրականացվում էր օրգանական արդյունահանման մեթոդների կիրառմամբ, ինչպիսիք են ֆենոլ քլորոֆորմի արդյունահանումը, որին հաջորդում էր էթանոլային տեղումները:

Նաև հարց է, թե ինչու է անհրաժեշտ PCR արտադրանքի մաքրումը:

Դու կարիք ունես մաքրել PCR արտադրանքը ազատվել չօգտագործված պրայմերներից, նուկլեոտիդներից և ֆերմենտներից՝ կապակցման հաջողությունը օպտիմալացնելու համար, որը կպահպանի և կհերթականի արտադրանք -ից ՊՇՌ . Դեպի մաքրել որ PCR արտադրանք , օգտագործվում է չափի բացառման քրոմատոգրաֆիա։

Բացի այդ, ինչ պետք է անեմ PCR-ից հետո: Վերականգնումը առավելագույնի հասցնելու համար ողողեք պահածոյացված բաժակը երկու անգամ 10-ից 20 µL TE կամ ջրով: Վերջնական ՊՇՌ ռեակցիան կարող է պարունակել մինչև միկրոգրամ ուժեղացված ԴՆԹ, որը կարող է օգտագործվել մոլեկուլային կենսաբանության մի շարք ծրագրերի համար: Այս հավելվածները կարող են քիչ թե շատ զգայուն լինել մնացորդային բաղադրիչների նկատմամբ ՊՇՌ ռեակցիայի խառնուրդ.

Կարելի է նաև հարցնել՝ ինչպե՞ս եք մաքրում PCR արտադրանքները:

Օգտագործված դասական մեթոդներ մաքուր վերև PCR արտադրանք նախքան հաջորդականացումը ներառում են գելային էլեկտրոֆորեզ, էթանոլային նստվածք և սյունակային քրոմատագրություն: Չնայած բավականին արդյունավետ, այս մեթոդները կարող են արագ դառնալ դժվար, երբ մի քանի նմուշներ զուգահեռ մշակվում են և ցուցադրում նմուշների կորստի տարբեր աստիճաններ:

Ինչու՞ պետք է մաքրվի ԴՆԹ-ն:

Մենք մաքուր վերև ԴՆԹ ջրային լուծույթներից հեռացնելու բուֆերային աղերը, ֆերմենտները կամ այլ նյութերը, որոնք կարող են ազդել հոսանքն ի վար կիրառման վրա: Օրինակները ներառում են PCR ռեակցիա մաքուր վերև, մաքուր սահմանափակումից հետո մարսում և մաքուր մինչև գենոմային կամ պլազմիդ ԴՆԹ աղտոտված է բջջային սպիտակուցներով/բեկորներով:

Խորհուրդ ենք տալիս: